klenow片段是指什么片段（klenow大片段名词解释）

摘要： 5、cDNA合成时要用到Klenow片段吗?...

本篇目录：

• 1、RNA酶H活性指的是什么意思?
• 2、klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么?
• 3、工具酶的连接酶:
• 4、klenow大片段酶和DNA聚合酶之间有什么关系
• 5、cDNA合成时要用到Klenow片段吗?

RNA酶H活性指的是什么意思?

1、通过将靶核酸与荧光标记的寡核苷酸探针杂交以检测核酸酶介导的靶核酸切割的方法，所述寡核苷酸探针与所述靶核酸互补并且在其一末端含有荧光团而在另外一末端则有猝灭基团。

2、RNaseH是一种逆转录酶，消化mRNA用的。RNaseH活性就是，RNaseH酶催化消化mRNA的能力。活性单位可用来表示酶活力的大小。

3、就是酶的活性.活性强，催化能力就强.酶活力（enzyme activity）也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力.酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高。

4、核糖核酸酶H（ribonuclease：H或RNase：H）是核酸内切酶，特异性水解与DNA杂交的RNA上的磷酸二酯键，产生带有3′-OH和5′-P末端的产物，不降解单链核酸、dsDNA或dsRNA。许多酶附带有该酶的活性，如AMV反转录酶。

5、转录介导的扩增技术，TMA技术原理与NASBA基本一致，略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7 RNA聚合酶两种酶，MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。

6、所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解，产生不同链长带3羟基和5磷酸末端的寡核糖核酸。

klenow酶与大肠杆菌DNA聚合酶I在结构上和功能上的主要区别是什么?

【答案】：DNA聚合酶Ⅰ的结构与功能：DNA聚合酶Ⅰ是由大肠杆菌polA基因编码的一种单链多肽蛋白，酶分子中包含一个双硫键和一个巯基，还含有锌离子，基本上是一个椭圆结构。

不同点：①DNA聚合酶I还具有5→3外切酶活性。②主要用途不同。

功能 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段，只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，失去了5’→3’外切酶活性。它可用于填补DNA单链末端成为双链。

为与大肠杆菌多聚酶I Klenow片段区别，将此酶命名为Taq DNA多聚酶(Taq DNA Polymerase)。此酶的发现使PCR广泛的被应用。

大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片断(KLENOW)：KLENOW片断是用枯草杆菌蛋白酶裂解完整的DNA聚合酶Ⅰ产生，或通过克隆技术而获得。此酶是单一多肽链，分子量76kD。

一般只能将2-脱氧核苷酸掺入到DNA链中。(4)该酶不是复制的主要聚合酶，因为此酶缺陷的大肠杆菌突变株的DNA复制都正常。可能在DNA的损伤修复中该酶起到一定的作用。经比较，它们之间还是有差别的。

工具酶的连接酶:

它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5-PO4与另一DNA链的3-OH生成磷酸二酯键。

基因工程工具酶主要包括限制酶、聚合酶、连接酶、修饰酶和核酸酶五大类，具体解释如下：DNA限制性内切酶 生物体内能识别并切割特异的双链DNA序列的一种内切核酸酶。

构建基因表达载体的工具酶：限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建是基因工程的核心，限制酶和DNA连接酶是构建基因表达载体的工具酶.在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。

klenow大片段酶和DNA聚合酶之间有什么关系

1、rna聚合酶作用不需要引物，而dna聚合酶作用需要引物。rna聚合酶本身具有一定的解旋功能，而dna聚合酶没有，当需要解开双链的时候要解旋酶和拓扑异构酶的帮助。

2、Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I，得到两个片段，其中大片段的分子量为75kDa，具有5-3聚合酶和3-5外切核酸酶的活性，小片段具有5-3外切核酸酶活性。

3、Klenow片段是DNA聚合酶Ⅰ被枯草杆菌酶作用产生的一个大片段，有5′→3′聚合酶和3′→5′外切酶活性，无5′→3′外切酶活性。可用于缺口翻译（Nick translation）法标记核酸，也可用于DNA序列测定，修补DNA链等。

4、Klenow 酶KlenowFragment，又称Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNApolymeraseI)的大片断(Large Fragment)。

cDNA合成时要用到Klenow片段吗?

Klenow片段是DNA-pol I（DNA聚合酶I）的大片段，具有完整的DNA-pol I的5‘到3’聚合活性、3‘到5’的外切活性，无5‘到3’的外切活性，一般是cDNA第二链的合成。

Klenow片段具有5′→3′聚合活性和3′→5′核酸外切酶活性，而无5′→3′核酸外切酶活性。在DNA重组技术中，Klenow片段作为DNA聚合酶，常用于cDNA第二条链的合成和标记双链DNA3′末端。

Klenow片段常用于cDNA第二链合成，双链DNA 3ˊ-末端的标记等。肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段，只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，失去了5’→3’外切酶活性。

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