本文作者:酷宝

在dna提取过程中氯仿的作用是什么(dna提取实验中加入氯仿的目的是)

酷宝 2024-10-22 23:41:20 12
在dna提取过程中氯仿的作用是什么(dna提取实验中加入氯仿的目的是)摘要: 本篇目录:1、酚氯仿抽提dna原理2、...

本篇目录:

酚氯仿抽提dna原理

原理:酚虽能有效地使蛋白质变性,却不能完全抑制RNA酶的活性,它还能溶解带有长poly(A)尾的RNA分子。使用两种不同的有机溶剂去除蛋白质比用单一有机溶剂效果更好。继而用氯仿抽提可除去核酸制品中残留的少量酚。

酚-氯仿法提取人外周血基因组DNA的基本原理是什么?蛋白质对DNA制品的污染常常影响到以后的DNA操作过程,因此需要把蛋白质除去。一般采用苯酚/氯仿抽提的方法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用,而对DNA无影响。

在dna提取过程中氯仿的作用是什么(dna提取实验中加入氯仿的目的是)

因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙醇,最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用0.6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA.一般在室温下放置15-30分钟即可。

提取动物组织DNA,加入氯仿-异戊醇有什么作用,为什么要重复?

1、氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。

2、DNA的提取:1 取2~5 g叶片或愈伤组织,加入适量液氮研碎,转入预冷的50ml离心管,加入20 ml DNA提取缓冲液充分摇匀,于65℃水浴60~90 min,中途轻轻摇匀两次。

3、酚氯仿异戊醇通常以25:24:1的比例用作抽提蛋白,也就是出去蛋白杂志的。

在dna提取过程中氯仿的作用是什么(dna提取实验中加入氯仿的目的是)

4、不要以为PDS沉淀的形成就能将所有的蛋白质沉淀了,其实还有很多蛋白质不能被沉淀,因此要用酚/氯仿/异戊醇进行抽提,然后进行酒精沉淀才能得到质量稳定的质粒DNA,不然时间一长就会因为混入的DNase而发生降解。

5、为什么用酚与氯仿抽提DNA时,还要加少量的异戊酵?在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生。

6、没遇到过从澄清变浑浊的情况,除非你吸上清的水平太差了。你继续往下提,能提出来就行,浑浊不浑浊不管他。还有你千万不能剧烈摇匀,不然什么都提不到。能多温柔就多温柔。

DNA提取中氯仿—异戊醇有什么作用

加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24:1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1。

在dna提取过程中氯仿的作用是什么(dna提取实验中加入氯仿的目的是)

异戊醇作用:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

有效使蛋白质变性而除去,重复可以更好的除去。酚是强烈的蛋白质变性剂,能有效使蛋白质变性而除去,氯仿有强烈的脂溶性,去除脂类杂质,本身酚:氯仿:异戊醇=25:24:1的主要作用是抽提蛋白质。

和DNA分离.EDTA是DNA酶的抑制剂,防止细胞破碎后DNA被降解.Tris/HCL是作为缓冲的,DNA在这一体系中呈稳定态;PVP、抗坏血酸钠用来防止氧化,氯仿、异戊醇是去除蛋白,酒精是沉淀DNA,因为DNA容易水,不溶于酒精。

有,氯仿-异戊醇中氯仿起到是蛋白质变性的目的,而异戊醇可以降低细胞表面张力减少泡沫产生,进而减少dna的损失,其中异戊醇是不溶于水的与氯仿在一相中即静止后的下层,使上层清夜中杂质尽量减少从而为后续DNA提取做好准备。

到此,以上就是小编对于dna提取实验中加入氯仿的目的是的问题就介绍到这了,希望介绍的几点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。

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