氯仿异戊醇什么颜色（氯仿异戊醇是核酸提取液吗）

摘要： 本篇目录：1、CTAB法中加入等体积氯仿/异戊醇离心后为什么有时上层液体也有绿色?请问......

本篇目录：

• 1、CTAB法中加入等体积氯仿/异戊醇离心后为什么有时上层液体也有绿色?请问...
• 2、为什么酚/氯仿/异戊醇的颜色必须为黄色才能用?
• 3、苯酚:氯仿:异戊醇为什么要25:24:1?
• 4、在做植物基因组提取实验时遇到的问题
• 5、氯仿异戊醇(24:1)怎么配置

CTAB法中加入等体积氯仿/异戊醇离心后为什么有时上层液体也有绿色?请问...

在用CTAB法提取时，刚投入水浴时可以稍快速的晃动，之后的晃动一定要轻柔！加酚/氯仿/异戊醇静置30min后，离心温度不可过低。尽量保持在15度以上。将DNA加入异丙醇析出时用的枪头一定要剪过的。这点很重要。

将上清转移至另一新的15ml离心管中，加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯仿/异戊醇。充分混匀，2300×g离心20min。5 转移上清至另一新的15ml离心管中，加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液，轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。

需要使用有害试剂：CTAB法需要使用氯仿、异戊醇和苯酚等有害试剂，这些试剂会对人体健康造成一定的影响。解决方法是在操作过程中要注意安全，戴好手套和口罩等防护用品，尽可能减少与有害试剂的接触。

用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

为什么酚/氯仿/异戊醇的颜色必须为黄色才能用?

1、首先，肯定不是蛋白质被吸上来了，你不放心可以少吸一点上清。由于某些植物中富含多酚多糖类物质，当从细胞中分离出来很容易氧化而转变成溶于水相的有颜色的成分。

2、提取DNA时加液氮的目的主要是防止DNA的降解，所以必须一直提醒自己，减少材料回温的机会，液氮保护必须自始至终。

3、提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。

4、将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。

5、通常，氯仿与异戊基发酵的比例为24：1。 苯酚，氯仿和异戊醇的比例也可以按25：24：1的比例使用。提取DNA时，为了均匀混合，必须将容器摇动几次，并且在混合溶液中容易产生气泡，并且气泡会阻止相互作用。

苯酚:氯仿:异戊醇为什么要25:24:1?

1、加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24：1。

2、酚是强烈的蛋白质变性剂，能有效使蛋白质变性而除去，氯仿有强烈的脂溶性，去除脂类杂质，本身酚：氯仿：异戊醇=25：24：1的主要作用是抽提蛋白质。氯仿-异戊醇能使蛋白质变性，从而将蛋白质从溶液中析出。

3、说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 ： 24 ： 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

4、苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25：24：1？ 抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。

5、用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

6、减少残留在水相中的酚，同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。在酚/氯仿抽提核酸提取液时，需要振摇，为防止起泡和促使水相与有机相的分离，再加上一定量的异戊醇（酚：氯：异戊醉=25：24：1）。

在做植物基因组提取实验时遇到的问题

1、首先，肯定不是蛋白质被吸上来了，你不放心可以少吸一点上清。由于某些植物中富含多酚多糖类物质，当从细胞中分离出来很容易氧化而转变成溶于水相的有颜色的成分。

2、避免核酸降解酶类的降解：植物组织中可能含有核酸降解酶类，这些酶可能会破坏DNA的结构，因此应尽量避免其活性。在研磨时加入液氮可以部分抑制这些酶的活性，同时应在低温环境下进行操作。

3、植物基因组提取注意事项如下： 实验室常用试剂几乎都有毒，尤其在DNA提取过程中涉及到的试剂也有很强毒性，接触后会对身体造成不同程度的影响和伤害，长期操作不规范将对身体造成极大的安全威胁。

4、DNA提取浓度低可能有以下原因 1)实验材料量太少，建议适当增加增加样本量；2)样品裂解不充分。保持样本量不变的情况适当增加裂解液。

5、为了获得高质量的植物总DNA，在分离过程中应注意以下问题： 材料选择：应选择无菌、新鲜的植物组织，以降低提取过程中污染的可能性并减少降解。

氯仿异戊醇(24:1)怎么配置

1、冷却后0.2-1% 2-巯基乙醇（400ul）氯仿-异戊醇（24：1）：先加96ml氯仿，再加4ml异戊醇，摇匀即可。

2、氯仿：异戊醇混合液氯仿：异戊醇按体积比24：1配制，现配现用。醋酸钠溶液配制3 mol／L的醋酸钠溶液，调节pH值至2。

3、不过一般都不会单独使用酚，而是将酚与氯仿异戊醇混合（25：24：1）取与上清等体积的混合液的下相作抽提用，一次不行可重复，然后再用氯仿异戊醇（24：1）抽提一次。另外转速和时间，你的完全可行。

4、加入600ul 氯仿：异戊醇（24：1=576：24），12000rpm。

5、需要。在制作固定液时，苯酚、氯仿和异戊醇的添加顺序是要注意的，不注意添加顺序会影响反应效果，先取氯仿10ml，再取苯酚5ml，最后加入异戊醇10ml，混合均匀后过滤，即可得到固定液。

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