脱脂奶粉封闭什么意思（脱脂奶封闭原理）
摘要：
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做wb实验时为什么要用脱脂奶粉的tbst封闭转移膜两小时
1、小时至2小时。wb脱脂奶封闭室温1至5h就可以，5%脱脂牛奶封闭时间2h；10%脱脂牛奶封闭时间1h；回收会稍微延长一些时间。时间充裕选择5%脱脂牛奶封闭2h效果最好。
2、阻断非特异性结合位点：在Western Blotting实验中，样品通过电泳分离后，会通过转移膜转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。然后，抗体将被添加到这些膜上进行反应。
3、在WB（Western Blot）实验中，使用10%的脱脂牛奶稀释TBST（TBS加Tween-20）的原因是牛奶中的蛋白质可以作为阻断剂，防止非特异性结合。这样可以减少背景着色，提高实验的特异性。
脱脂奶粉是什么意思?
脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再干燥而成，除脂肪可降低至1%左右外，其他变化不大。脱脂奶粉为乳白色或淡黄色，具温和乳香且带甜味，不可有变质焦味及异臭，粉末状。
脱脂奶粉是指新鲜乳在加工成奶粉的过程中，将乳中的脂肪分离出去的产品，仅以乳为原料，添加或不添加食品营养强化剂，经脱脂、浓缩、干燥制成的。脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再消毒、脱水、干燥制成的。
脱脂奶粉是通过去除新鲜牛奶中的脂肪并将其干燥而制成的。除了脂肪可以减少到1%之外，几乎没有任何变化。脱脂奶粉是以脱脂牛奶、浓缩牛奶和奶粉为原料，添加或不添加食物制成的粉末产品。
脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再干燥而成，除脂肪可降低至1%左右外，其他变化不大。
脱脂奶粉封闭液怎么配
如果是封闭抗体的话，一般就配5%的脱脂奶粉，5%多半指的是个g/100ml。也就是5g奶粉，100ml水的比例，完全溶解即可。如果担心牛奶里面有小颗粒没有溶解，可以用0.22um的膜过滤一下，防止有颗粒在膜上形成斑点的背景。
推荐用tbst进行稀释获得5%的牛奶封闭液（5g/100ml）。
AB液1：1混合后即可；封闭液直接买的现成品，不贵，效果也很好；抗体孵育的时候用杂交袋，可以减少抗体的用量；显影定影用国产几块一包的即可。封闭液是PBST配置的5%脱脂奶粉。
取1g BSA，加蒸馏水，定容到100ml就行了。最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA，封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭，封闭不当反而会使阴性本底增高。
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