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脱脂奶粉封闭什么意思(脱脂奶封闭原理)
本篇目录:
做wb实验时为什么要用脱脂奶粉的tbst封闭转移膜两小时
1、小时至2小时。wb脱脂奶封闭室温1至5h就可以,5%脱脂牛奶封闭时间2h;10%脱脂牛奶封闭时间1h;回收会稍微延长一些时间。时间充裕选择5%脱脂牛奶封闭2h效果最好。
2、阻断非特异性结合位点:在Western Blotting实验中,样品通过电泳分离后,会通过转移膜转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。然后,抗体将被添加到这些膜上进行反应。
3、在WB(Western Blot)实验中,使用10%的脱脂牛奶稀释TBST(TBS加Tween-20)的原因是牛奶中的蛋白质可以作为阻断剂,防止非特异性结合。这样可以减少背景着色,提高实验的特异性。
脱脂奶粉是什么意思?
脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再干燥而成,除脂肪可降低至1%左右外,其他变化不大。脱脂奶粉为乳白色或淡黄色,具温和乳香且带甜味,不可有变质焦味及异臭,粉末状。
脱脂奶粉是指新鲜乳在加工成奶粉的过程中,将乳中的脂肪分离出去的产品,仅以乳为原料,添加或不添加食品营养强化剂,经脱脂、浓缩、干燥制成的。脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再消毒、脱水、干燥制成的。
脱脂奶粉是通过去除新鲜牛奶中的脂肪并将其干燥而制成的。除了脂肪可以减少到1%之外,几乎没有任何变化。脱脂奶粉是以脱脂牛奶、浓缩牛奶和奶粉为原料,添加或不添加食物制成的粉末产品。
脱脂奶粉是将鲜牛奶脱去脂肪再干燥而成,除脂肪可降低至1%左右外,其他变化不大。
脱脂奶粉封闭液怎么配
如果是封闭抗体的话,一般就配5%的脱脂奶粉,5%多半指的是个g/100ml。也就是5g奶粉,100ml水的比例,完全溶解即可。如果担心牛奶里面有小颗粒没有溶解,可以用0.22um的膜过滤一下,防止有颗粒在膜上形成斑点的背景。
推荐用tbst进行稀释获得5%的牛奶封闭液(5g/100ml)。
AB液1:1混合后即可;封闭液直接买的现成品,不贵,效果也很好;抗体孵育的时候用杂交袋,可以减少抗体的用量;显影定影用国产几块一包的即可。封闭液是PBST配置的5%脱脂奶粉。
取1g BSA,加蒸馏水,定容到100ml就行了。最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的BSA,封闭是否必要,取决于ELISA的模式及具体的实验条件。并非所有的ELISA 固相均需封闭,封闭不当反而会使阴性本底增高。
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