WB实验中为什么分离胶不平（wb分离胶加多了）

摘要： 6、蛋白质电泳所加样品在浓缩胶中跑的不成一条直线,为什么?...

本篇目录：

• 1、分离胶不平能跑吗
• 2、wb电泳为什么不在一条线上
• 3、wb下层胶不平整会有什么影响
• 4、分离胶不平能用吗有毒吗
• 5、wb胶放了一个晚上为什么大小板分离了
• 6、蛋白质电泳所加样品在浓缩胶中跑的不成一条直线,为什么?怎么解决?

分离胶不平能跑吗

1、不跑。电泳跑两个板一个板分离胶少一个按分离胶多两者是不平衡的，因此是不跑的。电泳液体介质中带电的胶体微粒在外电场作用下相对液体的迁移现象。

2、，浓缩胶的要求就是将所有蛋白在浓缩胶和分离胶梯度的时候将所有蛋白压缩成一条线，保证他们在同一起跑线上。如果蛋白样品是不同时间的同一种，可能就是浓缩胶没摇匀。至于加样散，原因就可能是胶质不均了。

3、影响跑胶的，当气泡足够小并且胶快凝固的时候，走到中间的小气泡就停留在胶内，并会影响到后面的跑胶。

4、分离胶和浓缩胶的界面不平，导致跑胶出现这一现象；2）电泳槽存在封闭不严的情况，导致电压不稳，出现跑胶条带倾斜；3）上样量问题，上样量不准确，重新校正上样量；4）跑胶的边缘效应，点样最好不要靠近胶的两边。

5、上样缓冲液连成一线没关系，一般上样缓冲液的条带要比蛋白的宽，你转完膜染一下蛋白看看；线稍许不平也没关系，跑10分钟蛋白还在浓缩胶，到分离胶会逐渐平整的。

wb电泳为什么不在一条线上

wb电泳时条带不齐的原因：根据自己做的经验提供一点建议：胶是否是新配的，能先用小电跑，尽量让条带跑齐，再换大电压。

是不是也这个效果啊？感觉抗体特异性不太好。另外，各个泳道之间有什么区别？每个泳道条带都很粗，建议减少上样量，提高二抗稀释倍数，这样如果有一些稍微弱一点的结合也可以避免掉，看能不能有明显的条带出来。

得看你少的哪条带，一般来说最后一条带比较容易看不到，可能是由于你配胶的溶液放置时间长了浓度不够了，比如30%的丙烯酰胺。也可能是跑出去了或没跑完你就停了。

可能原因 胶制的不够均匀，胶的密度不够均一。胶块放置的没和电泳槽平行。胶块中有气泡。等等。。

出现这个现象的原因是：蛋白质浓度不同，前面几个泳动慢的样蛋白浓度太高，你可以稀释后再电泳。

一定。因为只有电泳跑到底了，相同分子量的蛋白才能在同一条线上，这样才能参照蛋白marker判断目的蛋白条带是否做出来了。

wb下层胶不平整会有什么影响

wb电泳一半平一半斜怎么回事”？胶没有配好，有气泡，界面不平。胶没有配好。导致wb电泳的胶均匀度不好。有气泡。也会一半平一半斜。界面不平。下层胶和上层胶的界面不平也会导致wb电泳一半平一半斜。

样品问题。因为Marker没有弯曲，样品里面的还原剂浓度，高了会出现wb下层胶中间高两边低，一般样品加入上样缓冲液后还原剂终浓度50mM。操作问题。

如果没有裂纹的话，就不会继续碎了，碎的部分不影响胶的定型，不影响橡皮圈密封效果，可以放到电泳槽里并且边缘接触密闭（buffer不能透过去）就没问题。小心点别扎手就OK了。

影响跑胶的，当气泡足够小并且胶快凝固的时候，走到中间的小气泡就停留在胶内，并会影响到后面的跑胶。

分离胶不平能用吗有毒吗

1、可以。蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶， 由于分子筛作用，小分子的物质容易通过， 阻力小，迁移速度快；大分子的则受到较大 的阻力而被滞后。

2、有影响 有以下几个原因：胶不均匀；这个可能性最大，因为你是不平整。放置不平整。胶槽不平，压胶的液体太少，至少1ml，第三，你必须要等胶干了才能晃动胶槽，夏天至少30min，冬天更久50min。

3、有害的，不管是浓缩胶还是分离胶里面都含有聚丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺这两种物质都是神经毒物，如果不小心碰到脸上了要马上洗脸。

4、一个是需要在灌入分离胶后用水压平，也防止凝胶氧化。另外也要考虑到凝胶中加入AP和TEMED的量，量过小则造成不易聚合，而量过大则会造成凝固过快，胶聚合不均一，不平整的情况。

wb胶放了一个晚上为什么大小板分离了

能。wb胶都是现配现用的，动作稍慢就会凝固。当然，制好胶后如果暂时不跑胶，可以把胶放进4℃冰箱保存一段时间也行。wb胶配好后，立即可用。只要胶凝固了就可以用了。

wb制好的胶能放多久 通过较高的ph值使蛋白质在胶中的移动速度缓慢，导致蛋白质不能够分离。使所有蛋白质都在浓缩在一起。

一抗浓渡过高是高背景的缘由之一，且二抗也存在与封锁剂非特异性分离的可能，因而倡议恰当优化一抗浓度，并设二抗阴性对照； ④曝光时间长。倡议在实验中采用适宜的曝光时间。

蛋白质电泳所加样品在浓缩胶中跑的不成一条直线,为什么?怎么解决?

1、，浓缩胶的要求就是将所有蛋白在浓缩胶和分离胶梯度的时候将所有蛋白压缩成一条线，保证他们在同一起跑线上。如果蛋白样品是不同时间的同一种，可能就是浓缩胶没摇匀。至于加样散，原因就可能是胶质不均了。

2、可能是电泳内槽漏液；也有可能是样品之间有空道，应点上对应的 loading -buffer。还有种可能是样品的盐浓度过高。

3、胶的浓度不对，这可能会导致不同浓度的胶跑出的蛋白条带的位置有偏差，甚至可能影响到胶的本身特性，需要调整浓度。

4、上样缓冲液连成一线没关系，一般上样缓冲液的条带要比蛋白的宽，你转完膜染一下蛋白看看；线稍许不平也没关系，跑10分钟蛋白还在浓缩胶，到分离胶会逐渐平整的。

5、感觉是你样品处理的不好，另外你说没有压成一条直线，应该是你的浓缩胶有问题，是不是浓缩胶加的太少了。本身TritonX-100就是一种非离子变性剂，提取完后最好得透析除去TritonX-100。

到此，以上就是小编对于wb分离胶加多了的问题就介绍到这了，希望介绍的几点解答对大家有用，有任何问题和不懂的，欢迎各位老师在评论区讨论，给我留言。