过氧化物酶使DAB变什么颜色（过氧化物酶作用机理）
摘要：
本篇目录：1、DAB染色液为什么会变深2、辣根过氧化物酶显色方法... 本篇目录：
DAB染色液为什么会变深
）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。
（1）盐酸溶液浓度不够。适当加入几滴盐酸以增加浓度。（2）制片用高于95%以上浓度的酒精固定后可以出现染色过深。应用95%酒精固定。细胞浆着色不佳 如果全片内胞浆都淡染，则需要延长染色时间或更换新液。
染色时间过长，染色液浓度过高，染色温度过高。染色时间过长，导致染色过度，使切片颜色变得深焦黑色。染色液浓度过高，也会导致染色过度，使切片颜色变得深焦黑色。
辣根过氧化物酶显色方法
1、TMB（3，3-二甲基联苯胺）和 HRP（辣根过氧化物酶）显色原理都是基于化学反应产生颜色变化来检测目标物质。这两种方法在实验中广泛应用，例如酶联免疫吸附实验（ELISA）和化学发光法（ECL）。
2、大部分Western blot显色底物是化学发光底物，发表文章通常也是用底物化学发光ECL。
3、根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。
4、过氧化物酶法常用辣根过氧化物酶（HRP），由于酶反应具有单一性，所以干扰因素较少。HRP的作用底物为过氧化氢，催化反应时的供氢体有几种：（1）邻苯二胺（OPD），产物为橙色可用肉眼观察判别。
5、当加入金属盐如钴、镍至底物液中，辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色，且在水及醇中稳定。DAB／金属盐染色应用的组织染色范围较广。
6、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）广泛分布于植物中，因辣根中含量最高而得名，由无色酶蛋白和深棕色铁卟啉（辅基）构成一种糖蛋白（含糖18%）。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。
如何做好ECL发光检测实验?
化学发光法是分子发光光谱分析法中的一类，它主要是依据化学检测体系中待测物浓度与体系的化学发光强度在一定条件下呈线性定量关系的原理，利用仪器对体系化学发光强度的检测，而确定待测物含量的一种痕量分析方法。
电致化学发光(ECL)也已成功地用作CE检测[36]。鲁米那等发光标记物在蛋白及基因的CE—CL检测中可能有很大的潜力，预计将会得到进一步发展。
发光试剂中的鲁米诺被HRP和H2O2氧化，产生荧光。所以AB液混合后发光是正常的，但是发光时间长短和发光液有很大关系，好的发光液比如英格恩公司的EnlithtTM，灵敏度高又不容易淬灭，是蛋白检测实验的一大助力。
化学发光法检查更准确 化学发光法采用化学发光燃料进行测试的方法，灵敏度高，分析方法简单快捷，检测时间短及诊断范围宽等优点，相对于酶联法，化学发光法检查更准确。
最简单的办法，比比两个瓶子的大小，如果一样大，就是1：1混合，如果大小差异很大，可能是1：40混合的。所以知道要用多少体积的底物，根据比例就能算出来。
艾滋病毒其实非常脆弱，一旦暴露于空气中（离开人体）便会很快死亡，因此艾滋病完全可以预防，已知的艾滋病感染途径就是体液交换及没有全程正确使用安全套。
DAB显色时红细胞的颜色什么
1、盐酸乙醇分化液可以把dab显色的背景弄浅一点。盐酸乙醇溶液是一种分化液，是常规病理苏木素-伊红（HE）染色中最常使用的分化液，通常使用的溶液为0.5%~1%盐酸溶于70％乙醇溶液所得。
2、再把这种液体用离心分离器分离处理，就得到红色透明的上清液（称溶血液）和极少量的沉淀物。
3、DAB的配制不对 抗原的暴露修复不对 一抗的效价太低 滴DAB时切片表面水太多。
4、目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。
5、使用dab显色后流水冲的时间会根据染料的种类而有差异，一般来说，植物染料可以在短时间内完成冲洗，而化学染料则需要较长时间，大约需要10-20分钟。
6、或者其他酶类）标记的链霉卵白素复合物孵育使其与生物素结合，然后和DAB反应的是HRP。简单来说就是：一抗--生物素化二抗结合一抗种属IgG--带HRP链霉卵白素结合生物素--DAB与HRP反应显色。
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