本文作者:酷宝

检测内参用什么抗体(内参抗体如何选择)

酷宝 2024-10-22 21:35:26 12
检测内参用什么抗体(内参抗体如何选择)摘要: 本篇目录:1、westernblot内参GAPDH成功了2、...

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westernblot内参GAPDH成功了

1、今天,早早地过去,就是希望把westernblot的流程完成了。洗膜。1X TBST洗膜,这个我已经提前配置好了,没有压力。5minX3次。孵一抗。按照GAPDH说明书,1:4000稀释一抗。我还以为4ml的一抗稀释液要16ul的抗体。

2、GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

检测内参用什么抗体(内参抗体如何选择)

3、GAPDH(甘油醛-3-磷酸脱氢酶)是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

4、【GAPDH的作用】广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,即将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后才进行样品与样品之间的比较。

5、在生物学试验中,内参通常是一种已知含量或者稳定表达的蛋白质或RNA,用来标准化同一实验中不同样品的数量差异。例如,在western blot实验中,内参可以是乳腺癌细胞中常见的丰度相对稳定的蛋白质如β-actin或GAPDH。

6、内参是最容易被忽略的一项。我们知道,要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中,目的蛋白表达量的相对多少,前提条件是等量的细胞上样,才有比较的基础。特别表达量不高时,上样量的差别就很可能影响结果的分析。

检测内参用什么抗体(内参抗体如何选择)

gapdh内参基因贴抗体

1、Gapdh内参基因贴抗体是用于检测Gapdh表达量的抗体,通常是由兔、小鼠或大鼠制备的多克隆抗体。

2、GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参。

3、这个基因就是内参基因,这类基因是生物体或者细胞中稳定表达的基因,表达量几乎不变。常用的内参基因如β-actin,gapdh,18s-rrna等。

组蛋白h3抗体可以做核蛋白内参吗

当实验样品中只是核蛋白,而不是细胞总蛋白提取液时,可以用组蛋白H(Histone H),或者核纤层蛋白(nuclear lamina protein)等为核内参抗体。除了这些,其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B 以上信息来自。

检测内参用什么抗体(内参抗体如何选择)

由4种组蛋白H2A、H2B、H3和H4, 每一种组蛋白各二个分子,形成一个组蛋白八聚体,约200 bp的DNA分子盘绕在组蛋白八聚体构成的核心结构外面,形成了一个核小体。

组蛋白可分为五种:HH2A、H2B、H3和H4,这五种组蛋白类型都有各自对应的自身抗体。 组蛋白与DNA一起形成了紧密结合的核小体。其中心由H3-H3-H4-H4四聚体组成,H2A-H2B二聚体位于其两侧。

当实验样品中只是核蛋白,而不是细胞总蛋白提取液时,可以用组蛋白H(Histone H),或者增殖细胞核抗原(PCNA)等为核内参抗体。

磷酸酯化等作用,这种组蛋白的分子修饰似乎与调节细胞周期内遗传因子机能的表达有关。

免疫组化研究显示,PHH3抗体可特异性检测处于第28位丝氨酸磷酸化时的核心组蛋白H3。

到此,以上就是小编对于内参抗体如何选择的问题就介绍到这了,希望介绍的几点解答对大家有用,有任何问题和不懂的,欢迎各位老师在评论区讨论,给我留言。

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