外切酶为什么不能降解ssdna（外切酶方向）

酷宝 2024-10-23 13:25:29 12

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摘要： 核酸的等温扩增是一个简单的过程，可以在恒定温度下快速有效地积累核酸序列，自1990年代初期以来，已开发出各种等温扩增技术来替代聚合酶链反应，这些等温扩增方法已用于生物传感目标，例如...

本篇目录：

1、等温扩增
2、无缝克隆引物不含酶切位点设计原理
3、调节性R-loops:促进基因表达和基因组稳定性(二)
4、核酸的相关分类
5、细菌基因编辑的基本工具与原理

等温扩增

核酸的等温扩增是一个简单的过程，可以在恒定温度下快速有效地积累核酸序列。自1990年代初期以来，已开发出各种等温扩增技术来替代聚合酶链反应(PCR)。这些等温扩增方法已用于生物传感目标，例如DNA，RNA，细胞，蛋白质，小分子和离子。

单引物等温扩增技术（SPIA）。依赖于解旋酶的等温扩增技术（HAD）。链接代扩增技术（SDA）。快速等温检测放大技术（RIDA）。切刻内切酶核酸恒温扩增技术（NEMA）。

与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。环介导等温扩增法是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。

无缝克隆引物不含酶切位点设计原理

无缝克隆的原理首先要强调的是，无缝克隆有两个主要的流派：Gibson assembly和Golden Gate assembly。

无缝克隆技术原理是依靠碱基间作用力互补配对成环，无需酶连即可直接用于转化宿主菌。目标区域选择：首先，通过人工或计算机自动化算法，选择要进行无缝克隆的目标区域，并提取出该区域的图像信息。

一步法同源重组是一种利用同源重组的原理，进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑酶切位点，几乎适用于任何载体与任何片段的定向克隆。操作过程简单快速，只需50℃，20min即可完成反应。

无缝克隆技术的基本原理是利用PCR技术（聚合酶链式反应）在体外扩增目标序列，并加入诸如限制酶等基因工具，将扩增后的DNA片段粘接到载体上，构建达到需要的目的序列。

调节性R-loops:促进基因表达和基因组稳定性(二)

1、通过GC偏倚区域的转录促进R-loop的积聚，因为G-rich RNA结合到C-rich DNA模板上具有较高的热力学稳定性。全基因组图谱显示，R-loops在DNA甲基化降低和DNase超敏性增加(染色质可及性)的位点富集。

2、矛盾的是，R-loops长期以来一直被认为是有害的转录副产物，它干扰转录过程本身，并导致基因组不稳定性。R-loop诱导的基因组压力与未能及时去除R-loops直接相关。

3、转录因子（transcription factor， TF）是真核基因的转录调节蛋白。大多数的转录因子由其编码基因表达后，进入细胞核，然后识别、结合特异的顺式作用元件从而增强或降低相应基因的表达。

核酸的相关分类

1、人体内核酸主要分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两种。脱氧核糖核酸（DNA）组成单位是：4种脱氧核苷酸，DNA的主要功能：作为遗传物质，携带遗传信息，控制遗传、变异和蛋白质合成。

2、核酸(nucleic acid)是重要的生物大分子，它的构件分子是核苷酸(nucleotide)。天然存在的核酸可分为：⑴脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)和核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)DNA贮存细胞所有的遗传信息，是物种保持进化和世代繁衍的物质基础。

3、核酸的分类：核酸大分子可分为两类：脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的作用。